禽网状内皮组织增殖病病毒gp90蛋白单克隆抗体的制备及其识别区分析

作者：孙明铭; 李晓齐; 曹红; 王永强; 郑世军

来源：生物工程学报, 2015, 31(01): 75-85.

DOI：10.13345/j.cjb.140225

• 禽网状内皮组织增殖病病毒
• gp90蛋白
• 单克隆抗体
• 亲和力
• 抗原表位

为了制备禽网状内皮组织增殖病病毒(REV)gp90蛋白的单克隆抗体,应用His-gp90融合蛋白免疫BALB/c小鼠,取免疫鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)进行融合,经过筛选、3次亚克隆后获得3株稳定分泌抗REV-gp90蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为3G5-B8、3G5-A10和1G12。经间接ELISA(Enzyme-linked immunosorbent assay)方法检测,单克隆抗体的亲和力解离常数(Kd)分别为6.483×10–10、4.844×10–10和9.330×10–10,3株单抗的亚型分别为Ig G1、Ig G1和Ig G2b。经Western blotting和间接免疫荧光实验检测,3株单抗均能识别REV感染DF-1细胞后产生的gp90蛋白。以Western blotting方法利用单抗检测不同截短的gp90蛋白,初步确定3G5-B8和3G5-A10 2株单抗抗原识别区均位于gp90蛋白第200-245位氨基酸,而1G12株单抗识别区包含第230-235位氨基酸。这些单抗为REV的诊断和致病机理研究奠定了基础。

• 出版日期2015
• 单位中国农业大学; 农业生物技术国家重点实验室