阿拉善双峰驼ENaCα亚基基因克隆及激素对肾皮质细胞中该基因表达的影响

作者：朱纯霄; 孙睿; 张焱如; 张东; 刘春霞; 孟凡华^*

来源：中国畜牧兽医, 2019, 46(02): 338-344.

DOI：10.16431/j.cnki.1671-7236.2019.02.002

• 阿拉善双峰驼
• 上皮细胞钠通道
• 醛固酮
• 血管紧张素Ⅱ

为探究阿拉善双峰驼上皮细胞钠通道的作用特点,试验采用深圳华大公司提供的ENaCα亚基基因片段序列设计PCR引物,提取阿拉善双峰驼肾皮质总RNA,反转录合成cDNA,PCR扩增获得双峰驼ENaCα亚基基因,构建克隆质粒pMD19-T-ENaCα,对重组质粒进行双酶切和测序分析;采集双峰驼肾皮质部分,细胞体外培养到P3代后,加入不同浓度的醛固酮(aldosterone)和血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ),实时荧光定量PCR技术检测细胞中ENaCα亚基基因的表达情况,以确定ENaCα对两种激素浓度变化的敏感性。结果显示,PCR扩增得到2.2kb的特异性条带,SmaⅠ和PstⅠ双酶切得到2.2和2.7kb的条带,表明重组质粒pMD19-T-ENaCα构建成功。实时荧光定量PCR结果显示,1×10-9 mol/L醛固酮和血管紧张素Ⅱ处理的双峰驼肾皮质细胞的ENaCα表达量显著高于对照组(P<0.05);1×10-6、1×10-7和1×10-8 mol/L醛固酮和血管紧张素Ⅱ表达量显著低于对照组(P<0.05)。本研究结果为揭示双峰驼水盐代谢的生理机制提供了试验依据。

• 出版日期2019
• 单位内蒙古农业大学; 生命科学学院