Ⅱ型cGMP依赖性蛋白激酶重组腺病毒载体的构建、鉴定及初步应用

作者：屈睿; 刘加宝; 桑建荣; 任峰; 赵爽; 陈永昌

来源：江苏大学学报(医学版), 2010, (01): 36-39+51.

DOI：10.13312/j.issn.1671-7783.2010.01.002

• Ⅱ型cGMP依赖性蛋白激酶
• 腺病毒载体
• DNA重组
• 胞外信号调节激酶 cGMP dependent protein kinase Ⅱ gene
• adenoviral vector
• DNA recombination
• ERK

目的:构建携带Ⅱ型cGMP依赖性蛋白激酶(PKGⅡ)基因的重组腺病毒载体,并以此初步研究PKGⅡ对增殖相关的MAPK信号转导的影响。方法:将PKGⅡcDNA片段自载体pRC/CMV-GKⅡ(wt)中切出,克隆至穿梭质粒pENTR 1A,用ClonaseⅡ将pENTR-PKGⅡ中的PKGⅡcDNA片段定向克隆到pAd/CMV/V5-DEST中构建pAd/CMV/V5-DEST-PKGⅡ(Ad-PKGⅡ)。重组质粒Ad-PKGⅡ用PacⅠ酶酶切,使其线性化,再用脂质体转染法转染HEK293A细胞进行包装和扩增,微量全细胞病变法检测病毒滴度,蛋白质印迹法检测重组腺病毒Ad-PKGⅡ感染细胞后PKGⅡ...

• 出版日期2010
• 单位江苏大学