ABRO1基因敲除小鼠骨髓来源巨噬细胞的永生化及其LPS/TLR4通路活化的检测

作者：张煊宜; 詹轶群; 杨晓明^*; 尹荣华^*

来源：军事医学, 2018, 42(04): 249-253.

• ABRO1
• 小鼠,基因敲除
• 骨髓
• 巨噬细胞
• 永生化
• 细胞增殖
• 细胞凋亡
• LPS/TLR4信号通路
• Toll样受体4

目的永生化ABRO1基因敲除(KO)小鼠骨髓来源的巨噬细胞系(BMDM),并确定缺失ABRO1对巨噬细胞LPS/TLR4通路活化的影响。方法用p CDH-SV40LT-puro慢病毒分别感染野生型(WT)及ABRO1 KO小鼠的BMDM,连续传代培养>50代,得到永生化细胞系。利用MTS法和Ed U掺入法检测细胞增殖,AnnexinⅤ/7-AAD双染色后用流式细胞仪检测细胞凋亡。脂多糖(LPS)刺激细胞后,Western印迹法检测NF-κB及MAPK信号通路,并用流式微球阵列(CBA)检测细胞产生IL-6、TNF-α的水平。结果成功构建了ABRO1 WT和KO的永生化BMDM(i BMDM)。正常培养下,WT及KO i BMDM细胞增殖能力和细胞凋亡均无明显差异,但撤除血清后,KO i BMDM细胞凋亡明显高于WT。LPS刺激后,NF-κB、MAPK信号通路激活及IL-6、TNF-α的产生无明显差异。结论ABRO1缺失不影响LPS/TLR4信号通路。敲除ABRO1促进血清撤除诱导的i BMDM凋亡。

• 出版日期2018