颗粒溶素的克隆表达及活性分析

作者：王晚霞; 兰喜; 徐向红; 居军; 柳纪省

来源：基础医学与临床, 2010, (01): 75-79.

DOI：10.16352/j.issn.1001-6325.2010.01.003

• 颗粒溶素
• 原核表达 granulysin
• prokaryotic expression

目的克隆人颗粒溶素基因并进行原核表达。方法体外分离并培养外周血单个核细胞,抽提总RNA,RT-PCR扩增人颗粒溶素的基因片段,并将其插入pMD18-T进行测序,鉴定正确后分别将目的基因亚克隆至pET32a(+),构建原核表达质粒pET-GNLY9K和pET-GNLY15K,将重组质粒转入大肠杆菌Rosetta(DE3),IPTG诱导表达融合蛋白,SDS-PAGE和Western-blot鉴定融合蛋白的正确性。MTT检测颗粒溶素融合蛋白的生物活性。结果成功构建了原核表达载体pET-GNLY9K和pET-GNLY15K,经诱导在原核表达系统中高效表达了相应分子质量约31和37ku的融合蛋白,重组颗...

• 出版日期2010
• 单位家畜疫病病原生物学国家重点实验室; 甘肃省人民医院; 中国农业科学院兰州兽医研究所