LKB1抑制人巨细胞肺癌细胞的增殖和迁移侵袭、mTOR磷酸化与VEGF和MMP9表达

作者：陈逸轩; 刘燕; 娄丽丽; 时妍梅; 陈文莉; 陈新年

来源：中国组织化学与细胞化学杂志, 2017, 26(03): 205-211.

DOI：10.16705/j.cnki.1004-1850.2017.03.001

• 肝激酶B1
• 增殖
• 迁移
• 侵袭
• 基质金属蛋白酶
• 雷帕霉素靶蛋白
• 血管内皮生长因子

目的分析肝激酶B1（liver kinase B1,LKB1）对人巨细胞肺癌（the people giant cell lung cancer,PGCL3）细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其机制。方法构建真核表达载体p CMV-LKB1,转染人巨细胞肺癌细胞。转染后48h,用免疫印迹法检测各组细胞LKB1蛋白表达水平,明确转染PGCL3效率。转染后每隔12h、连续72h检测LKB1对细胞增殖能力的影响;Transwell小室检测转染后各组细胞迁移、侵袭力。提取各组细胞蛋白检测基质金属蛋白酶2（matrix metalloproteinase 2,MMP2）、基质金属蛋白酶9（matrix metalloproteinase 9,MMP9）、雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin,m TOR）和血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）的表达水平。结果 p CMV-LKB1经PCR、双酶切及DNA测序鉴定后,证实目的基因片段插入方向正确,核酸序列与NCBI公布的LKB1的核酸序列一致;免疫印迹分析显示,转染p CMV-LKB1的PGCL3细胞中LKB1表达水平明显增高,表明p CMV-LKB1构建成功。增殖曲线分析和5-乙炔基-2,脱氧嘧啶核苷（5-ethynyl-2,-deoxyuridine,Ed U）检测显示,转染p CMV-LKB1能显著抑制PGCL3细胞的增殖;Transwell小室检测显示,过表达LKB1可显著抑制PGCL3细胞的迁移与侵袭;免疫印迹分析显示,过表达LKB1的PGCL3细胞其LKB1下游分子中总m TOR表达量不变,磷酸化m TOR（p-m TOR）水平降低,m TOR下游分子VEGF表达量也显著降低,迁移侵袭相关蛋白MMP2表达无变化,但MMP9水平显著降低。结论 LKB1可能通过下调PGCL3细胞p-m TOR水平,降低VEGF表达,从而抑制巨细胞肺癌细胞增殖,并可能通过下调金属基质蛋白酶MMP9的表达,降低巨细胞肺癌细胞迁移侵袭能力。

• 出版日期2017
• 单位第一临床医学院; 兰州大学; 基础医学院