口蹄疫病毒O型OHM/02株全长cDNA感染性克隆的构建

作者：苗书魁; 魏玉荣; 魏婕; 米晓云; 汪萍; 马文戈; 王延; 薛英; 易忠; 黄炯

来源：动物医学进展, 2018, 39(01): 1-6.

DOI：10.16437/j.cnki.1007-5038.2018.01.001

• 口蹄疫病毒
• 全长cDNA
• 转染
• 病毒拯救

为构建O型口蹄疫病毒(FMDV)的感染性克隆,采用RT-PCR将O型FMDV OHM/02株全长基因组分为5个重叠的片段进行扩增,克隆至载体pUC57中,获得全长cDNA克隆pPO-1。将线性化的pPO-1与含有编码T7 RNA聚合酶的真核表达重组质粒共转染BHK-21细胞,出现致细胞病变效应(CPE)。对拯救的病毒进行RT-PCR扩增、酶切、测序,表明人工设计的分子标记Bam HⅠ酶切位点消失,排除了亲本毒株污染的可能性。间接免疫荧光试验可以检测到绿色荧光,电镜观察可观察到病毒粒子,表明构建了具有感染性的OHM/02毒株全长cDNA克隆。病毒生长曲线表明,拯救病毒与亲本病毒的复制能力和增殖特性相似。OHM/02株全长cDNA感染性克隆的构建及拯救可为FMDV致病机理的研究提供一种重要工具,可促进疫苗的研发。

• 出版日期2018
• 单位新疆畜牧科学院兽医研究所; 天康生物股份有限公司