柯萨奇病毒A组5型VP1蛋白原核表达及多克隆抗体的制备

作者：靳卫平; 卢佳; 吴杰; 胡岗; 周金戈; 王文辉; 王泽鋆; 孟胜利; 申硕^*

来源：国际生物制品学杂志, 2020, (02).

• 柯萨奇病毒A组5型
• 原核细胞
• 基因表达
• 多克隆抗体
• VP1

目的 原核表达柯萨奇病毒A组5型(coxsackievirus A5,CV-A5)VP1蛋白,并制备抗VP1多克隆抗体(多抗),为CV-A5相关定性定量研究制备试剂。方法 逆转录PCR扩增N端截短的CV-A5VP1-ΔN56后,克隆至原核表达载体pGEX-6P-1,获得pGEX-6P-1-VP1-ΔN56。将其转化大肠埃希菌BL21(DE3),表达重组蛋白并纯化。用纯化的谷胱甘肽巯基转移酶-VP1-ΔN56融合蛋白经背部皮下免疫日本大耳白兔,制备多抗。结果 重组表达载体构建成功,融合蛋白以不可溶包涵体存在。ELISA、蛋白质印迹法检测表明,获得的兔多抗效价为107,可特异性识别重组和天然CV-A5 VP1蛋白。结论 成功制备重组CV-A5 VP1蛋白及特异性多抗。为中和抗原表征研究及VP1定性定量分析奠定了基础。

• 出版日期2020
• 单位武汉生物制品研究所