不同探针大小、标记物及反应底物对马铃薯类病毒杂交检测的影响

作者：吕典秋; 刘尚武; 邱彩玲; 李勇; 宿飞飞; 王绍鹏; 吕文河

来源：植物病理学报, 2011, (02): 154-160.

DOI：10.13926/j.cnki.apps.2011.02.007

• 马铃薯纺锤块茎类病毒
• 探针
• 核酸斑点杂交
• 标记 Potato spindle tuber viroid(PSTVd)
• probe
• nucleic acid spot hybridization(NASH)
• labeling

灵敏可靠地检测马铃薯纺锤块茎类病毒(Potato spindle tuber viroid,PSTVd)对脱毒种薯的生产具有重要意义。本研究探索了影响核酸杂交检测技术的关键因素。通过基因克隆技术构建了插有PSTVd全长单体、双体及片段的载体。分别以地高辛和同位素为标记物,利用PCR和转录标记技术制备cDNA和RNA探针。比较探针大小、标记物、标记方法、反应底物等对检测灵敏度的影响。结果显示,以地高辛为标记物,利用PCR标记制备的PSTVd双体cDNA探针,在以CDP-Star为底物,通过在柯达X-OMAT BT胶片进行化学发光反应来分析结果的检测灵敏度最高,可以检测到0.05 pg总RNA中的...

• 出版日期2011
• 单位黑龙江省农业科学院; 东北农业大学