可溶性CD40配体对白血病THP-1细胞生物学影响及机制研究

作者：封忠昕; 陈琦^*; 王季石; 袁钟; 闵迅; 张振东; 付书南; 葛晓军; 邱顺华

来源：中华肿瘤防治杂志, 2019, 26(10): 690-694.

DOI：10.16073/j.cnki.cjcpt.2019.10.003

• 可溶性CD40配体
• THP-1细胞
• 细胞增殖
• 细胞凋亡
• 侵袭
• 迁移
• PI3K/AKT信号通路

目的急性单核细胞白血病(acute monocytic leukemia,AMoL)具有易浸润、易复发、预后差和死亡率高等特点。可溶性CD40配体(soluble CD40ligand,sCD40L)在肿瘤细胞抗原递呈等方面发挥重要作用。本研究分析不同浓度的sCD40L对人白血病THP-1细胞增殖、凋亡、侵袭迁移及对PI3K/AKT信号传导通路表达影响,并初步探讨其可能的作用机制。方法不同浓度2、4和6μg/mL的sCD40L作用THP-1细胞24h,采用CCK-8法检测sCD40L对THP-1细胞增殖抑制作用,流式细胞术AnnexinⅤFITC/PI法检测细胞凋亡的影响,迁移实验Transwell法检测3组不同浓度sCD40L单用或者联合PI3K抑制剂LY294002对THP-1细胞迁移能力的影响,蛋白质印迹法检测PI3K/AKT信号传导通路中关键蛋白PI3K、AKT、p-PI3K、p-AKT、MMP-2和MMP-9蛋白表达。结果CCK-8法检测2μg/mL的sCD40LA值为0.317±0.029,细胞增殖抑制率为(23.62±2.17)%,细胞凋亡率为(14.32±2.01)%;4μg/mL的sCD40LA值为0.253±0.021,细胞增殖抑制率为(37.24±3.68)%,细胞凋亡率为(50.40±6.17)%;6μg/mL的sCD40L作用THP-1细胞24h后A值为0.196±0.017,细胞增殖抑制率为(52.13±4.96)%,细胞凋亡率为(67.53±7.26)%;对照组A值为0.58±0.05,增值抑制率为(11.63±1.07)%,细胞凋亡率为(8.79±0.92)%;增值抑制率之间比较,差异有统计学意义,F=83.184,P=0.001;细胞凋亡率之间比较,差异有统计学意义,F=100.759,P<0.001;Transwell法结果显示,单独使用sCD40L干预,随着sCD40L浓度增加,细胞迁移能力逐渐降低,同时加入PI3K抑制剂LY294002后,细胞迁移能力降低,与对照组比较,差异有统计学意义,F=90.033,P<0.001;蛋白质印迹法结果显示,随着sCD40L浓度增加,PI3K、AKT、p-PI3K、p-AKT、MMP-2和MMP-9蛋白表达随之降低,加入PI3K抑制剂LY294002后,AKT(F=5.394,P=0.004)、PI3K(F=5.689,P=0.004)、p-AKT(F=7.621,P=0.001)、p-PI3K(F=8.787,P<0.001)、MMP-2(F=6.827,P=0.002)和MMP-9(F=11.903,P<0.001)蛋白表达降低,与对照组比较,差异有统计学意义。结论 sCD40L能够在体外抑制白血病THP-1细胞增殖、诱导凋亡及抑制侵袭迁移,可能通过影响PI3K/AKT信号传导通路,抑制MMP-2和MMP-9蛋白表达发挥作用,为sCD40L用于AMoL的治疗提供了一定的实验依据。

• 出版日期2019
• 单位自贡市第三人民医院; 贵州医科大学; 遵义医科大学