CYP2A13/MRP2双表达Flp-InTM CHO细胞系的建立

作者：刘香香; 何俊奇; 杨畅; 王永林; 薛维娜; 何彬; 李勇军; 兰燕宇; 刘亭^*

来源：细胞与分子免疫学杂志, 2019, 35(10): 865-871.

DOI：10.13423/j.cnki.cjcmi.008916

• 细胞色素P450家族2亚家族A成员13(CYP2A13)
• 多药耐药相关蛋白2(MRP2)
• 4-甲基亚硝胺-1-3-吡啶基-1-丁酮(NNK)
• 稳定转染
• 双表达
• TM CHO细胞" name="keyword">Flp-InTM CHO细胞

目的构建稳定表达细胞色素P450家族2亚家族A成员13(CYP2A13)和多药耐药相关蛋白2(MRP2)的双转染Flp-InTM CHO细胞系。方法分别构建pCMV6-NEO-CYP2A13和pcDNA5-MRP2重组质粒。先将pCMV6-NEO-CYP2A13重组质粒转染至Flp-InTM CHO细胞中,通过有限稀释法和4-甲基亚硝胺-1-3-吡啶基-1-丁酮(NNK)细胞毒性实验筛选CYP2A13活性较高的CYP2A13-Flp-InTM CHO细胞。再将pcDNA5-MRP2转染至CYP2A13-Flp-InTM CHO细胞中。用实时定量PCR、 Western blot法和NNK细胞毒性实验,检测双转染细胞及正常细胞中CYP2A13和MRP2的表达量及其活性,筛选稳定表达CYP2A13和MRP2的Flp-InTM CHO细胞。结果相较于未转染细胞, CYP2A13-Flp-InTM CHO细胞的CYP2A13表达增加, NNK毒性敏感度增加; CYP2A13/MRP2-Flp-InTM CHO细胞的CYP2A13和MRP2表达也明显增加。和CYP2A13-Flp-InTM CHO细胞相比, CYP2A13/MRP2-Flp-InTM CHO细胞的CYP2A13表达量无明显差异, MRP2表达增加, NNK毒性敏感度明显降低。结论成功建立了CYP2A13和MRP2的双转染细胞模型,为呼吸道致癌物质原位激活研究奠定了基础。

• 单位
  贵州医科大学