PC12细胞谷胱甘肽二硫键氧化还原酶cDNA的克隆表达与序列分析

作者：杨歌德; 周宏博; 刘长振; 王爱民

来源：中国地方病学杂志, 2005, (02): 48-50.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1000-4955.2005.02.016

• 逆转录聚合酶链反应
• 蛋白质二硫化物还原酶(谷胱甘肽)
• 克隆与表达
• 序列分析

目的获得PC12细胞谷胱甘肽二硫键氧化还原酶全长cDNA及表达的蛋白质,分析比较该cDNA及外推的蛋白质序列。方法用逆转录PCR(RT鄄PCR)获得该蛋白cDNA并将其分别克隆和亚克隆于PUC18和PQE31载体,受体细胞为BL21。亲和层析分离重组蛋白,SDS电泳分析表达产物。结果PC12细胞谷胱甘肽二硫键氧化还原酶全长cDNA含324个碱基,编码含107个氨基酸的蛋白质,并与小鼠和人的该序列有高度同源性,获得了具有活性的谷胱甘肽二硫键氧化还原酶。结论构建了PC12细胞谷胱甘肽二硫键氧化还原酶cDNA在大肠杆菌细胞的克隆表达体系;测定了该蛋白cDNA序列并推导出它的氨基酸排列顺序;证明了该蛋白与人和小鼠具有高度同源性。

• 单位
  清华大学; 生物化学教研室; 哈尔滨医科大学