亲环素D对棕榈酸诱导的胰岛β细胞凋亡机制的初步研究

作者：程思源; 吴玉文; 何光珍; 王华蔚; 胡勇; 徐焱成^*

来源：中华糖尿病杂志, 2021, 13(08): 814-820.

• 亲环素类
• 胰岛β细胞
• 脂毒性
• 线粒体通透性转换孔

目的探讨亲环素D(CypD)对棕榈酸诱导的小鼠胰岛β细胞株MIN6细胞凋亡的影响及机制。方法在MIN6细胞中建立CypD过表达稳转细胞系与CypD敲低稳转细胞系, 将细胞分为对照组(未转染病毒)、OE-ctrl组[转染过表达对照病毒未用棕榈酸(PA)处理]、OE-ctrl+PA组、OE-CypD组(转染CypD过表达病毒未用PA处理)、OE-CypD+PA组、KD-ctrl组(转染敲低对照病毒未用PA处理)、KD-ctrl+PA组、KD-CypD组(转染CypD敲低病毒未用PA处理)、KD-CypD+PA组, 每组3个复孔。流式细胞仪检测各组细胞凋亡率, 实时荧光定量聚合酶链反应与Western blot法检测各组CypD的mRNA及蛋白表达量。Western blot法检测凋亡相关蛋白[B细胞淋巴瘤2(Bax)、B细胞淋巴瘤2相关X蛋白(Bcl-2)、半胱氨酸依赖的天冬氨酸蛋白酶(Caspase)3、细胞色素c(Cyt-c)、凋亡酶激活因子1(Apaf-1)]的表达。共聚焦显微镜检测细胞内钙离子荧光。两组间比较采用t检验, 多组间比较采用单因素方差分析。结果与对照组相比, 随着PA浓度上升, MIN6细胞凋亡率显著升高(P<0.01), CypD mRNA(分别为1.00±0.04和1.88±0.02)和CypD蛋白表达量(分别为0.049±0.004和0.577±0.006)均明显升高, 差异具有统计学意义(P<0.01)。与OE-ctrl+PA组比较, OE-CypD+PA组细胞凋亡率升高[分别为(31.33±2.72)%和(24.95±0.94)%, P<0.05], 细胞内钙离子荧光信号增加(分别为27.62±0.74和24.61±0.15, P<0.01), 凋亡相关蛋白Bax、Caspase3、Cyt-c、Apaf-1水平升高(均P<0.01), 细胞存活蛋白Bcl-2水平降低(P<0.01)。与KD-ctrl+PA组比较, KD-CypD+PA组细胞凋亡率降低[分别为(22.87±0.34)%和(26.91±0.93)%, P<0.05], 细胞内钙离子荧光信号减少(分别为23.26±0.65和27.82±0.86, P<0.01), 凋亡蛋白Bax、Caspase3、线粒体相关凋亡蛋白Cyt-c、Apaf-1水平降低(均P<0.01), Bcl-2水平升高(P<0.01)。结论 CypD加重PA诱导的MIN6细胞脂毒性损伤, 可能与线粒体功能障碍有关。敲低CypD对脂毒性下的MIN6细胞有保护作用。

• 出版日期2021
• 单位武汉大学中南医院