多杀性巴氏杆菌HN06株磷酸甘油酸变位酶gpmA基因的序列分析及其原核表达

作者：曾东柱; 李慧; 孔汉金; 郭锐; 吴斌

来源：中国兽医科学, 2015, (01): 57-60.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2015.01.008

• 多杀性巴氏杆菌
• 磷酸甘油酸变位酶
• gpmA基因
• 原核表达
• 纯化
• 免疫印迹 Pasteurella multocida
• phosphoglycerate mutase
• gpmA gene
• prokaryotic expression
• purification
• Western-blot

为探索糖酵解关键酶磷酸甘油酸变位酶的功能,采用PCR方法从多杀性巴氏杆菌HN06株中扩增出了磷酸甘油酸变位酶基因gpmA,将其克隆到表达载体pET-30a(+)中,测序验证后转入表达菌株大肠杆菌BL21中进行IPTG诱导表达。结果显示,重组菌可表达出分子质量约为32ku的重组融合蛋白,在终浓度为20mmol/L IPTG诱导3h的情况下表达良好。表达的蛋白以可溶性蛋白的形式存在于菌体中。表达产物经Ni柱纯化后可得到纯度较高的目的蛋白。经过Western-blot分析,所纯化的蛋白能与抗多杀性巴氏杆菌HN06株阳性血清进行特异性的免疫印迹反应,证实表达的蛋白具有良好的反应原性。

• 出版日期2015
• 单位华中农业大学