鳜鱼TCRα基因实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

作者：吴明皇; 常藕琴; 石存斌; 吴淑勤

来源：广东农业科学, 2011, (06): 1-5.

DOI：10.16768/j.issn.1004-874x.2011.06.078

• 鳜鱼
• TCRα基因
• 实时荧光定量PCR Siniperca chuatsi
• TCRα gene
• real-time fluorescent quantitative PCR

根据GeneBank上鳜鱼TCRα基因序列设计并合成特异性引物,以鳜鱼β-actin基因为内参,采用RT-PCR方法从鳜鱼的胸腺总RNA中扩增得到鳜鱼TCRα和β-actin基因,将目的片段纯化后克隆到PMD18-T载体上,测序鉴定。以阳性质粒为标准品,采用SYBR GreenⅡ染料法进行实时荧光定量PCR扩增,构建标准曲线并进行溶解曲线分析。结果表明,鳜鱼TCRα基因的Ct值与标准品稀释度在102～108拷贝/μL范围呈良好的线性关系,r2达0.99以上,溶解曲线分析表明产物为特异的单峰。

• 出版日期2011
• 单位中国水产科学研究院珠江水产研究所; 大连海洋大学