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摘要
目的:观察AGEs对体外培养的大鼠GMC TRPC6表达的影响,及AGEs,TGF-β1,TRPC6三者的关系,探讨糖尿病肾病的发病机制。方法:原代培养大鼠肾小球系膜细胞,3代后GMC无血清培养基培养24小时后,实验组分别加入终浓度AGE-BSA 0 mg/L,50mg/L,100mg/L,200mg/L,对照组分别加入终浓度BSA 0mg/L,50 mg/L,100mg/L,200mg/L,刺激24小时,收集细胞,提取蛋白质,应用免疫印迹和免疫荧光技术检测TRPC6的表达;同样细胞同步化后予TGF-β1 10ng/ml处理,设阴性对照组,免疫印迹,RT-PCR和免疫荧光技术检测TRPC6的表达。结果:1.GMC检测到TRPC6的表达,以细胞膜表达为主,胞浆也有少许表达。2.不同剂量AGE-BSA,BSA对GMC TRPC6蛋白表达的影响:BSA组50,100,200mg/l组TRPC6的表达与0mg/l组比较,无统计学意义(p>0.05)。AGE-BSA组50,100,200mg/l组TRPC6的表达分别为0mg/l组的67%,33%,13%,有统计学意义(p<0.05),提示AGE-BSA刺激GMC 24小时,TRPC6的表达水平下调,且呈剂量依赖性。3.与BSA组相比,免疫荧光显示AGE-BSA组TRPC6蛋白表达减少。4.与正常组相比,TGF-β1作用24小时后,TRPC6核酸和蛋白表达水平下降(p<0.05)5.与正常组相比,TGF-β1作用24小时后,免疫荧光显示TRPC6蛋白表达减少。结论:GMC表达TRPC6,以细胞膜表达为主,胞浆也有少许表达;AGEs诱导GMC TRPC6表达下调,TGF-β1引起GMC TRPC6表达减少,AGEs又能诱导GMC TGF-β1表达上调,提示AGEs可能部分通过TGF-β1途径引起TRPC6表达减少。TRPC6表达异常后,胞内钙内流异常,影响GMC收缩,分泌胞外基质的功能,同时与GMC增生及凋亡等有关,导致糖尿病肾病的早期肾小球高滤过,蛋白尿,晚期的肾小球硬化,参与糖尿病肾病的发病机制。
- 出版日期2011
- 单位上海交通大学
