钙结合蛋白S100A4调节小鼠骨髓源肥大细胞活化的作用

作者：吴通前; 金筱茜; 马岚; 周萍萍; 李静; 袁锐; 余芳^*

来源：贵州医科大学学报, 2020, 45(12): 1365-1370.

DOI：10.19367/j.cnki.2096-8388.2020.12.001

• 小鼠,基因敲除
• 肥大细胞
• 钙结合蛋白
• β-氨基己糖苷酶
• 炎性因子
• 肥大细胞活化

目的:探讨钙结合蛋白S100A4调节小鼠骨髓源肥大细胞(BMMC)活化的作用。方法:8～10周龄野生型(WT)和S100A4基因敲除(S100A4-/-) C57BL/6健康雄性小鼠各2只,取胫骨与股骨提取骨髓进行骨髓源肥大细胞(BMMC)培养并鉴定;以成熟WT BMMC为模型细胞,实验分为S100A4蛋白处理组(1 500μg/L S100A4蛋白)和磷酸盐缓冲液(PBS)对照组(S100A4蛋白等量体积PBS),分别于培养第1、2及3周采用甲苯胺蓝染色鉴定小鼠成熟BMMC,采用化学发光法检测各组小鼠成熟BMMC中β-氨基己糖苷酶(β-hex)的吸光度(OD),采用流式细胞术检测各组小鼠成熟BMMC的S100A4蛋白表达和白细胞介素-5(IL-5)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-13(IL-13)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的荧光强度并计算相对荧光指数(r FI);以成熟WT和S100A4-/-BMMC为模型细胞,实验分为WT离子霉素(ION)处理组(1 500μg/L ION)、WT PBS对照组(ION等量体积PBS)、S100A4-/-ION处理组(1 500μg/L ION)及S100A4-/-PBS对照组(ION等量体积PBS),采用化学发光法检测各组小鼠成熟BMMC中β-hex的吸光度(OD)。结果:BMMC培养至3周时基本成熟,并表达S100A4蛋白; S100A4蛋白处理组成熟BMMC中β-hex、IL-5、IL-6、IL-13及TNF-α水平高于PBS对照组(P <0. 05或P <0. 01); WT ION处理组成熟BMMCβ-hex、IL-5、IL-6、IL-13及TNF-α水平高于WT PBS对照组(P <0. 01),S100A4-/-ION处理组成熟BMMC中β-hex、IL-5及IL-6明显高于S100A4-/-PBS对照组(P <0. 05),S100A4-/-ION处理组成熟BMMC中β-hex、IL-5、IL-6、IL-13及TNF-α水平均低于WT ION处理组(P <0. 05)。结论:S100A4蛋白能够直接诱导成熟BMMC活化,S100A4基因的缺失可抑制成熟BMMC活化及炎性因子的产生。

• 出版日期2020
• 单位武汉大学; 贵州医科大学