抗冷冻蛋白Ⅲ对玻璃化冷冻小鼠卵母细胞线粒体的影响

作者：刘可可; 薛梦琦; 唐非台; 杜倩笙; 王欣雨; 董胤余; 王晓丽^*

来源：中国畜牧兽医, 2023, 50(08): 3180-3188.

DOI：10.16431/j.cnki.1671-7236.2023.08.015

• 抗冷冻蛋白Ⅲ(AFPⅢ)
• 线粒体
• 卵母细胞
• 玻璃化冷冻

【目的】探索抗冷冻蛋白Ⅲ(antifreeze proteinⅢ,AFPⅢ)对玻璃化冷冻小鼠卵母细胞线粒体的保护作用。【方法】以5～8周龄昆明雌性小鼠为试验材料，将收集的小鼠MⅡ期卵母细胞随机分为空白对照组、冷冻对照组(经过玻璃化冷冻-解冻过程)和AFPⅢ添加组(在冷冻平衡液及冷冻液中均添加500 ng/mL AFPⅢ),利用线粒体绿色荧光探针(Mito-Tracker green, MTG)检测线粒体分布及含量，JC-1荧光染色检测线粒体膜电位，溶酶体红色荧光探针(Lyso-Tracker red, LTR)检测线粒体与溶酶体共定位，二氯荧光素二乙酸(DCFH-DA)检测活性氧(ROS)水平，ATP Assay Kit检测线粒体ATP含量。【结果】与空白对照组相比，玻璃化冷冻后小鼠卵母细胞的线粒体含量显著降低，部分线粒体呈现异常的散点状分布，且线粒体-溶酶体共定位情况明显增多，线粒体膜电位显著降低(P<0.05);同冷冻对照组相比，AFPⅢ添加组的小鼠卵母细胞线粒体含量显著升高，异常分布的线粒体和线粒体-溶酶体共定位情况减少，线粒体膜电位显著升高(P<0.05)。与空白对照相比，玻璃化冷冻后小鼠卵母细胞的ROS含量显著升高而ATP含量显著降低(P<0.05);与冷冻对照组相比，AFPⅢ添加组ROS含量显著下降而ATP含量显著升高(P<0.05)。【结论】AFPⅢ有助于改善玻璃化冷冻小鼠卵母细胞的氧化应激反应，对冻融卵母细胞线粒体具有保护作用。

• 出版日期2023
• 单位广西大学