穿膜肽标记的荧光素酶蛋白在大肠杆菌中表达条件的优化及其活性研究

作者：余婷玉; 方志远; 黄卫; 王淋荆; 徐宁

来源：实验技术与管理, 2018, 35(02): 62-66.

DOI：10.16791/j.cnki.sjg.2018.02.016

• 荧光素酶
• 穿膜肽
• ATP
• 表达条件
• 酶活性

将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,在不同的诱导时机、诱导温度、IPTG的浓度和Mg2+浓度条件下培养大肠杆菌,通过SDS-PAGE和发光强度检测分析TAT-LUC的酶活性强度及表达量;将高活性的TAT-LUC与LUC对比检测ATP,通过发光强度分析TAT-LUC的敏感性和可靠性。表明:在含Mg2+浓度为50mmol/L的LB培养基中将大肠杆菌培养至OD600为0.6时,加入终浓度为0.5mmol/L的IPTG,22℃诱导16h可获得大量高活性的TAT-LUC;相比LUC,TAT-LUC可以检测到小于10nmol/L的ATP,发光强度与ATP含量呈强相关性(R2=0.99);并且不用裂解细胞,TAT-LUC可直接检测至少40个细胞内ATP;穿膜肽标记的荧光素酶蛋白成功用于检测活细胞内的ATP含量。

• 单位
  中国科学院广州生物医药与健康研究院; 广东省中医院; 广州中医药大学