Smad3基因敲除对5/6肾切除慢性肾脏纤维化小鼠模型的影响

作者：麻志恒; 倪健俐; 钟利平; 何立群

来源：辽宁中医杂志, 2022, 1-14.

• Smad3基因敲除
• 5/6肾切除
• 慢性肾脏纤维化

目的：观察Smad3基因敲除对5/6肾切除慢性肾纤维化小鼠模型的影响。方法：清洁级WT-C57及Smad3-KO(以下简写S3-KO)小鼠各24只，分为假手术野生组（SWT）、假手术Smad3-KO组（SS3-KO）和模型野生组（MWT）、模型Smad3-KO组（MS3-KO）4组，模型组以platt法建立慢性肾脏纤维化模型，造模后4周，检测各组小鼠血中肌酐(Scr)、尿素氮（BUN）、24小时尿蛋白(U-Pro/24h)含量、病理形态学变化；免疫荧光染色法观察肾组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA），I型胶原蛋白（CollageI），纤维连接蛋白（FN）的表达面积变化；蛋白免疫印迹法（WB）和实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测各组小鼠肾组织TGF-β1、p-Smad3、α-SMA、CollageI、FN蛋白及mRNA的表达水平；免疫组化法观察肾组织内中性粒细胞阳性表达个数的变化。结果：与假手术组比较，MWT组P-smad3蛋白，Smad3mRNA明显增高(P＜0.01)，MS3-KO组虽有增高，但无显著性差异(P>0.05)。HE染色SWT，SS3-KO组肾小球形态基本正常，天狼星染色肾组织间质无或有少许红色胶原纤维沉积。MWT，MS3-KO组肾小球明显异常，天狼星染色MWT，MS3-KO组间质能够见到明显的胶原纤维，MS3-KO组病理改变总体轻于MWT组。经过图像处理分析可见，胶原纤维面积MS3-KO组面积小于MWT组，组间比较均有显著性差异(P＜0.05)。指标方面，SWT与SS3-KO组比较，α-SMA、CollageI、FN免疫荧光面积，Scr、Bun、U-Pro/24h水平，TGF-β_(1)、α-SMA、CollageI、FN蛋白和mRNA相对表达水平，中性粒细胞阳性表达个数均无显著性差异(P>0.05)，M组与其S组比较上述指标含量明显增高(P＜0.01或P＜0.05)，而MS3-KO与MWT比较，MWT组上述指标上升更为明显，组间差异有统计学意义（P＜0.01或P＜0.05)。结论：Smad3-KO能够减少模型组小鼠肾组织TGF-β_(1)、α-SMA 、FN、CollageI蛋白和mRNA的表达，改善肾功能，减少中性粒细胞的表达，能够减轻模型所致的肾脏纤维化病理损害，对肾脏损害有一定的保护作用。

• 出版日期2022-7-13
• 单位上海中医药大学附属曙光医院; 湖北省中西医结合医院