柯萨奇病毒B3型感染引起HeLa细胞内源性小干扰RNA的变化

作者：姚海兰; 宋娟; 王欣玲; 王瑞芳; 宋芹芹; 史冰田; 韩俊^*

来源：微生物与感染, 2020, 15(02): 98-103.

• 柯萨奇病毒B3型
• HeLa细胞
• 内源性小干扰RNA

探究柯萨奇病毒B3型(Coxsackie virus type B3, CVB3)感染的细胞是否诱导内源性小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)的产生。以CVB3接种HeLa细胞,在细胞培养箱(5%CO2、37℃)孵育1 h。随后加入含2%血清的细胞维持液,继续培养3 h和6 h后收集细胞。用高通量测序(二代测序)试剂盒提取细胞RNA,并反转录合成cDNA,构建文库,上机测序。过滤数据,去除插入片段过长的序列、低质量序列、poly A序列和小片段序列,与已知的小RNA数据库比对鉴定siRNA。通过茎-环反转录-聚合酶链反应,证实内源性siRNA在感染CVB3后的表达。结果显示,感染CVB3 3 h和6 h后,HeLa细胞产生了多种内源性siRNA。其中内源性siRNA(novelsir3502和novelsir2806)在感染后3 h和6 h均可持续表达。经比对,novelsir3502和novelsir2806均可以识别45S和28S核糖体前体RNA。结果提示,CVB3感染可能干扰核糖体成熟。

• 出版日期2020
• 单位中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所; 首都儿科研究所; 传染病预防控制国家重点实验室