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摘要
目的探讨热应激过程中骨骼肌细胞发生损伤的具体形式,以及重症中暑合并横纹肌溶解的机制。方法将人骨骼肌细胞(HSKMC)分为对照组与热打击组,对照组细胞于37 ℃、5% CO2细胞培养箱中孵育;热打击组细胞于43 ℃、5% CO2细胞培养箱中孵育2 h构建热打击损伤模型,然后置于37 ℃、5% CO2细胞培养箱中孵育。待孵育0、6、12、24 h后,采用CCK-8法检测细胞活力,LDH法检测细胞毒性,透射电子显微镜观察细胞超微结构的变化情况,Annexin Ⅴ-FITC/PI双染色法检测双阳性细胞率,Western blotting检测细胞中porimin、caspase-3蛋白的表达情况。结果与对照组比较,热打击后复温0h HSKMC细胞活力即开始下降,细胞毒性即增加,且均呈时间依赖性(P<0.05)。对照组细胞表面具有丰富的微绒毛,线粒体、内质网等细胞器结构清晰,核大浓染,形态不规则,染色质浓密,核仁大而清晰;热打击组细胞肿胀、体积变大,胞质空泡化,线粒体明显肿胀,脱颗粒,双嵴消失,核周间隙增宽,细胞核凝聚、固缩,部分包膜连续性中断,且后期伴随有核仁溶解消失,细胞核碎裂、染色质边集,以及胞质结构崩解呈颗粒状等超微结构改变,符合细胞胀亡样表现。与对照组比较,热打击组porimin蛋白的表达水平及双阳性细胞率明显增高(P<0.05),caspase-3蛋白的表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论热打击可诱导骨骼肌细胞胀亡而非凋亡。
