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摘要
为获得禽流感病毒(Avian influenza virus, AIV)NP蛋白的单克隆抗体，将构建的重组表达质粒pET-30a-NP转化BL21细胞，经IPTG诱导表达、纯化后作为免疫原，免疫8周龄Balb/c雌性小鼠，并按常规方法制备杂交瘤细胞。通过ELISA方法、Western-blot方法进行筛选，获得3株杂交瘤细胞株，命名为3A6、2H12、5F7,并进行了培养特性、分泌抗体活性、分泌抗体亚类的鉴定。结果显示：3株细胞株连续传10代均稳定分泌单克隆抗体，分泌的单克隆抗体亚型均为IgG2b,轻链类型均为Kappa。制备并纯化了以上3株单克隆抗体，浓度分别为2.9、2.5、2.8 mg/mL,纯度不低于90%。West-blot检测，单抗与H7血凝抑制试验抗原、H5血凝抑制试验抗原、H9N2病毒能发生特异性反应，说明单抗具有广谱性，且与IBDV、REV、IBV、MDV、ALV、AE、ILT、NDV、EDSV等均无特异性条带出现，说明特异性良好。本研究制备的3株针对禽流感NP蛋白的单抗，具有较好的特异性、保守性和广谱性，为下一步开展AIV诊断试剂如IFA检测试剂盒、ELISA检测试剂盒等的研制奠定了物质基础。
- 出版日期2023
- 单位中国兽医药品监察所
