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摘要
【目的】探究缺失编码丙酮酸脱氢酶蛋白的aceE基因对猪链球菌生长特性、三羧酸循环和丙酮酸代谢的影响。【方法】通过测量菌液的OD600值，绘制野生型菌株与aceE基因缺失突变株的生长曲线；利用试剂盒测定三羧酸循环和丙酮酸代谢旁路中乙酰CoA、琥珀酸CoA、延胡索酸、草酰乙酸、丙酮酸、乳酸和ATP的含量，通过荧光定量qRT-PCR确定柠檬酸合酶基因、苹果酸脱氢酶基因、琥珀酸脱氢酶基因、异柠檬酸脱氢酶基因、丙酮酸脱羧酶基因、乳酸脱氢酶基因、乙醇脱氢酶基因和乙醛脱氢酶基因的表达水平。【结果】与野生株相比，菌株ΔaceE在平台期OD600值下降；添加1g/L乙酸盐能够显著提升菌株ΔaceE平台期OD600值。菌株ΔaceE的丙酮酸含量上升，ATP含量下降；三羧酸循环代谢中乙酰CoA、琥珀酸CoA、延胡索酸含量降低；柠檬酸合酶基因和苹果酸脱氢酶基因表达水平上升，琥珀酸脱氢酶基因和异柠檬酸脱氢酶基因表达水平下调；在丙酮酸代谢旁路中丙酮酸脱羧酶基因、乳酸脱氢酶基因、乙醇脱氢酶基因和乙醛脱氢酶基因表达水平上升。【结论】结果显示，菌株ΔaceE三羧酸循环活性降低，虽然能够通过PDH旁路将部分丙酮酸分解为乙酸盐，进一步转化为乙酰CoA进入三羧酸循环，但ATP含量仍未恢复至野生株水平，这为进一步研究代谢改变与细菌表型的关系提供了理论基础。
- 出版日期2022
- 单位动物科技学院; 河南科技大学
