绵羊肺炎支原体和小反刍兽疫病毒双重RT-PCR检测方法的建立

作者：霍晓丽; 李文良^*; 毛立; 杨蕾蕾; 刘茂军; 张纹纹; 李基棕; 孙敏

来源：江苏农业科学, 2020, 48(19): 185-189.

DOI：10.15889/j.issn.1002-1302.2020.19.041

• 绵羊肺炎支原体
• 小反刍兽疫病毒
• 双重RT-PCR
• 标准质粒
• 混合感染

绵羊肺炎支原体(MO)和小反刍兽疫病毒(PPRV)都可以造成山羊和绵羊的呼吸系统疾病,二者常呈现混合感染,给我国养羊业造成巨大的威胁和经济损失,对二者的检测有助于了解临床疾病混合感染情况、更好地防控呼吸道疾病。本研究的目的是建立同时检测绵羊肺炎支原体和小反刍兽疫病毒的双重RT-PCR检测方法。根据公布的基因序列针对MO和PPRV的16S rDNA和N基因设计合成2对特异性引物,构建标准质粒,进而通过退火温度和引物浓度的优化、特异性和灵敏性检测,建立双重RT-PCR方法。结果显示,该方法能特异性扩增MO(359 bp)和PPRV(686 bp)基因片段,其特异性好,敏感性高,对MO和PPRV的最小检出量分别为103拷贝/μL和102拷贝/μL。对部分临床样品检测结果显示,该方法可有效检测这2种病原,与单重PCR具有较高的符合率。本研究建立的双重RT-PCR方法具有良好的特异性和敏感性,可用于临床样品MO和PPRV感染的快速检测。

• 出版日期2020
• 单位江苏省农业科学院