大鼠微小RNA-22腺病毒载体的构建和鉴定

作者：范致星; 杨简; 杨俊; 丁家望; 彭家芹; 杨超君

来源：中华老年心脑血管病杂志, 2014, (08): 853-855.

• 腺病毒科
• 微RNAs
• 心肌再灌注损伤
• 质粒
• 转染
• 脂质体 adenoviridae
• microRNAs
• myocardial reperfusion injury
• plasmids
• transfection
• liposomes

目的构建并鉴定大鼠miR-22腺病毒载体,制备具有一定滴度含miR-22基因的重组腺病毒,为后期研究miR-22在心肌缺血再灌注损伤中的作用及分子机制奠定基础。方法化学合成目的基因序列(含酶切位点),对目的基因进行PCR扩增、酶切,酶切后的目的基因与酶切后的GV202载体连接产生miR-22腺病毒表达载体,将连接好的产物转化大肠杆菌DH5a感受态细胞获得大量阳性克隆,对阳性克隆进行酶切鉴定及测序鉴定。利用脂质体2000试剂,让成功构建的miR-22重组腺病毒载体和腺病毒包装质粒共转染人胚肾293细胞,得到重组腺病毒,完成重组腺病毒扩增、纯化及滴度测定。结果成功构建了大鼠miR-22腺病毒载体。...

• 出版日期2014
• 单位三峡大学