可溶性GST-CRH蛋白原核表达条件的优化及纯化

作者：郁硕; 陈锋; 刘英富; 霍景瑞; 李光宗; 张益; 丁辉; 樊毫军

来源：天津医药, 2017, 45(02): 146-150.

• 促肾上腺皮质素释放激素
• 谷胱甘肽巯基转移酶
• 原核表达
• 纯化

目的通过谷胱甘肽巯基转移酶(GST)-促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)原核表达条件的优化及纯化,获得可溶性好、纯度高的重组GST-CRH蛋白。方法通过对GST-CRH转化菌表达温度、菌液密度(OD600)、异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)浓度以及诱导时间的摸索,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测可溶性GST-CRH蛋白的表达情况,GST琼脂糖凝胶进行GST-CRH的纯化,Western Blot对表达的目的蛋白进一步鉴定。结果起始OD6000.8、IPTG工作浓度0.1 mmol/L、30℃诱导8 h为GST-CRH最优诱导条件;融合蛋白经Western Blot鉴定为表达的GST-CRH,纯化后纯度>95%。结论建立了GST-CRH的原核表达及纯化方法,获得了高纯度的GST-CRH可溶性蛋白。

• 出版日期2017
• 单位新乡医学院; 武警后勤学院