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摘要
目的:探讨O-GlcNAc转移酶（OGT）通过O-GlcNAc糖基化修饰稳定Kruppel样因子5（KLF5）蛋白并上调细胞周期素D1（CCDN1）表达参与结直肠癌（CRC）发生、发展的分子机制。方法:采用生物信息学方法分析KLF5 mRNA和蛋白在CRC组织中的表达。采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测CRC细胞中KLF5的表达水平，CCK-8法检测细胞增殖，流式细胞仪检测细胞周期。通过生物信息学方法分析KLF5的靶基因和潜在结合位点，并通过双荧光素酶实验证实KLF5蛋白可与CCDN1结合，采用RT-qPCR检测KLF5对CCDN1 mRNA的影响。抑制KLF5并过表达CCDN1,分析KLF5是否通过正调控CCDN1促进细胞增殖和促进细胞进入G1期。采用生物信息学分析KLF5蛋白是否存在O-GlcNAc糖基化位点，OGT mRNA和蛋白在结直肠癌组织中的表达以及OGT和KLF5表达的相关性。使用OGT抑制剂OSMI-1处理CRC细胞，蛋白质免疫印迹法（Western blot）分析KLF5蛋白表达，O-GlcNAc糖基化蛋白表达水平通过免疫荧光实验检测。并用Western blot法检测OSMI-1和放线菌酮（CHX）处理后KLF5蛋白的稳定性。最后抑制OGT并过表达KLF5,分析OGT是否通过正调控KLF5促进CCDN1表达。结果:KLF5 mRNA和蛋白在CRC中高表达。KLF5在CRC细胞中高表达并可促进细胞增殖和促进细胞进入G1期。CCND1是KLF5的靶基因并可与CCND1靶向结合。KLF5通过正调控CCND1促进细胞增殖和促进细胞由G1期向S期转化。生物信息学分析证实KLF5蛋白存在O-GlcNAc糖基化位点。OGT mRNA和蛋白在CRC中高表达，并且OGT和KLF5表达水平呈正相关。抑制OGT表达可降低O-GlcNAc糖基化蛋白和KLF5蛋白水平，并可降低KLF5蛋白的稳定性。OGT通过正调控KLF5上调CCND1表达。结论:KLF5通过正调控CCND1促进CRC细胞增殖，并促进细胞进入G1期。OGT通过O-GlcNAc糖基化修饰稳定KLF5并上调CCND1表达。
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单位川北医学院; 南充市中心医院
