CHIP参与高糖介导下的血管内皮细胞损伤

作者：乔先栋; 刘婷; 洪丽英; 付勇南^*

来源：中国病理生理杂志, 2020, 36(08): 1368-1374.

• 糖尿病
• 热休克蛋白70羧基末端相互作用蛋白
• 人脐静脉内皮细胞
• 细胞凋亡
• 氧化应激

目的:探讨热休克蛋白70羧基末端相互作用蛋白(CHIP)在高糖(HG)介导的血管内皮细胞损伤中的作用。方法:培养原代人脐静脉内皮细胞(HUVECs),利用RNA干扰技术下调CHIP表达,再以5.5 mmol/L正常浓度葡萄糖(NG)或25.5 mmol/L高浓度葡萄糖(HG)处理24 h,实验前用甘露醇排除渗透压对实验的干扰,接着将细胞分成NG+siRNA NC组、NG+siRNA CHIP组、HG+siRNA NC组和HG+siRNA CHIP组。MTT法和TUNEL染色法分别检测细胞活力和凋亡率;ELISA试剂盒检测内皮素1(ET-1)的表达水平;二氢乙啶荧光染料法检测细胞内活性氧簇(ROS)水平;一氧化氮(NO)、超氧化物岐化酶(SOD)及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)试剂盒分别检测细胞内NO水平及SOD、iNOS活性;RT-qPCR检测白细胞介素8(IL-8)和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的mRNA表达量;Western blot检测CHIP、NADPH氧化酶(NOX)2、NOX4、p38、p65、p-p38、p-p65、Bax和Bcl-2蛋白表达水平。结果:与NG+siRNA NC组相比,HG+siRNA NC组HUVECs死亡率、凋亡率及IL-8和MCP-1 mRNA表达水平均升高(P<0.05),细胞内ROS水平升高(P<0.05),SOD活性下降(P<0.05),ET-1、NO水平及iNOS活性升高(P<0.05),pp38、p-p65和Bax蛋白水平升高(P<0.05)。与HG+siRNA NC组相比,HG+siRNA CHIP组HUVECs炎症反应和氧化应激反应明显增强,凋亡率显著升高(P<0.05),p-p38和p-p65蛋白水平升高(P<0.05)。结论:下调CHIP表达可加重HG介导的血管内皮细胞损伤。

• 出版日期2020
• 单位江西省高血压研究所; 南昌大学第一附属医院; 南昌大学