应用RNAi敲减MARCH6基因对乳腺癌MCF-7细胞增殖及周期的影响

作者：沈妮; 王玉洁; 周卫兵; 王展; 涂青松; 姜武忠

来源：中南大学学报(医学版), 2016, 41(10): 1009-1015.

• MARCH6
• RNA干扰
• 细胞增殖

目的:应用慢病毒介导的RNAi技术,在乳腺癌MCF-7细胞中敲减MARCH6基因的表达,研究其对MCF-7细胞增殖及细胞周期的影响。方法:靶向MARCH6基因的sh RNA慢病毒转染293T细胞后,在荧光显微镜下观察转染效率;收集慢病毒液感染MCF-7细胞后,应用实时荧光PCR和Western印迹验证RNAi敲减MARCH6基因后,MARCH6基因m RNA和蛋白的表达影响;应用MTT,Brd U细胞增殖实验检测细胞增殖能力的变化;采用增殖指数染色流式细胞术检测细胞周期和增殖的改变。结果:通过在荧光显微镜下观察,MARCH6 sh RNA慢病毒质粒成功转染293T细胞,与同明视野对比,可见80%左右的细胞带绿色荧光;感染MCF-7细胞,90%的细胞均带绿色荧光;实时荧光PCR和Western印迹验证了MARCH6 sh RNA慢病毒感染MCF-7细胞后,MARCH6在转录水平和蛋白水平表达均显著下降;MTT实验、Brd U法结果显示MARCH6基因敲减组的MCF-7细胞增殖显著下降(P<0.01),流式细胞术分析显示MARCH6敲减后MCF-7细胞出现细胞周期抑制,细胞分裂处于G1期细胞数明显增多,增殖指数显著降低。结论:敲减乳腺癌MCF-7细胞的MARCH6基因表达后,抑制了MCF-7细胞的增殖,并引起细胞周期G1期阻滞。提示MARCH6通过影响细胞周期的进展,促进乳腺癌细胞的增殖。

• 出版日期2016
• 单位中南大学湘雅医院