雌二醇通过激活SIRT1/P53通路对人晶状体上皮细胞抗凋亡作用研究

作者：潘家钰; 康刚劲^*; 徐曼华; 彭正虹; 申苑莎

来源：眼科新进展, 2020, 40(05): 420-424.

DOI：10.13389/j.cnki.rao.2020.0097

• 雌二醇
• 人晶状体上皮细胞
• 沉默信息调节因子1
• P53
• 细胞凋亡

目的探究雌二醇(estradiol,E2)对H2O2诱导的人晶状体上皮细胞(HLE-B3细胞)氧化损伤的保护作用及抗凋亡机制。方法不同浓度H2O2作用于HLE-B3细胞,探索最佳浓度。将HLE-B3细胞随机分成5组:空白对照组,模型组(100μmol·L-1 H2O2),低、中、高浓度E2组(100μmol·L-1 H2O2+0.01μmol·L-1、0.10μmol·L-1、1.00μmol·L-1 E2),观察各组细胞形态变化。采用CCK-8和流式细胞学检测细胞的增殖与凋亡,观察不同浓度的E2对HLE-B3细胞的影响。RT-qPCR检测沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)mRNA、P53 mRNA表达。Western blot检测SIRT1、肿瘤抑制蛋白P53、乙酰化P53(acetylate P53,Ac-P53)蛋白表达,免疫荧光化学检测SIRT1定位及荧光强度。结果 100μmol·L-1H2O2为诱导HLE-B3细胞氧化应激的最佳浓度。CCK-8检测结果显示:低、中、高浓度E2组的细胞增殖率均高于模型组(均为P<0.05)。流式细胞学检测结果显示:模型组细胞凋亡率均高于其他各组,两两比较:空白对照组<高浓度E2组<中浓度E2组<低浓度E2组<模型组(均为P<0.05)。RT-qPCR及Western blot检测结果表明:SIRT1表达随着E2浓度的升高而增加,高浓度E2组>中浓度E2组>低浓度E2组>模型组>空白对照组(均为P<0.05)。Ac-P53在空白对照组表达与高浓度E2组差异无统计学意义(P>0.05),其余组间Ac-P53表达比较:模型组>低浓度E2组>中浓度E2组>高浓度E2组(均为P<0.05)。空白对照组中P53表达均低于其他各组(均为P<0.05),其余各组之间两两比较,差异均无统计学意义(均为P>0.05)。共聚焦免疫荧光化学检测结果示:SIRT1荧光强度随着E2浓度升高而增强。结论 E2对HLE-B3细胞的保护作用与SIRT1/P53通路相关,在生理浓度范围化学检测内,随着E2浓度的增加,SIRT1表达增强,抑制Ac-P53,减少HLE-B3细胞凋亡。

• 出版日期2020
• 单位西南医科大学