埃兹蛋白(Ezrin)及其突变体的原核表达与纯化

作者：刘腾飞; 陈妙娟; 高学娟; 刘小会; 刘朗夏

来源：氨基酸和生物资源, 2012, (04): 29-34.

DOI：10.14188/j.ajsh.2012.04.013

• 埃兹蛋白
• 野生型
• 组成型激活突变
• 显性负突变
• 融合蛋白表达与纯化 ezrin
• wild type
• constitutively active mutant
• dominant-negative mutant
• expression and purification of recombinant protein

Thr567位点磷酸化是ezrin活化的必需条件。利用定点突变引物将T567突变为A或D,通过PCR扩增出相应的基因片段,将其通过T4连接酶连接至含His标签的原核表达载体pET-20b(+),构建了原核重组质粒pET-20b(+)-Ez WT,pET-20b(+)-EzT567A和pET-20b(+)-EzT567D。转化表达宿主大肠杆菌Rosseta后,用异丙基-β-硫代半乳糖诱导重组蛋白的表达。重组蛋白经亲和镍柱纯化以后,应用western blot鉴定纯化的融合蛋白。Ezrin野生型及其组成型激活和显性负突变质粒的成功构建及其目的蛋白His-Ez WT,His-EzT576A和His-...

• 出版日期2012
• 单位暨南大学