一步法实时荧光定量PCR检测白血病WT1基因mRNA

作者：许文娟; 徐兵; 李冰

来源：南方医科大学学报, 2008, (02): 290-292.

• 聚合酶链反应定量
• 白血病
• WT1基因 polymerase chain reaction
• quantitative
• leukemia
• WT1 gene

目的构建RT-PCR一步法实时荧光定量PCR检测WT1基因mRNA表达的方法,准确定量检测白血病患者微小残留病,指导临床判断预后和早期预测复发。方法从K562细胞提取的RNA用特异性引物扩增WT1基因,pMD18-T载体克隆法构建荧光定量PCR标准模板,建立RT-PCR一步法实时荧光定量PCR检测WT1基因方法,并对该方法的灵敏度、重复性和稳定性进行检测。结果构建的RT-PCR一步法实时荧光定量PCR方法的灵敏度达10-4水平;以拷贝数为1.0×106~1.0×102cps/ml的标准品,分别进行RT-PCR一步法实时荧光定量PCR扩增后,标准品的Ct值与该标准品模板起始浓度的对数存在线性关系,r值达0.998;管间和批间的变异系数均小于8%。结论所建立RT-PCR一步法实时荧光定量PCR检测WT1基因方法的灵敏度、重复性和特异性好;RT和PCR反应过程一步完成,更简便快捷,减少加样和污染机会,更适合临床检测。

• 出版日期2008
• 单位南方医科大学