跨膜emp24结构域蛋白4在肝癌患者肝组织中的表达及其对肝癌细胞生物学行为的影响

作者：汪礼洋; 黄伟; 吴书桢; 马韬; 刘肇修; 陆翠华^*

来源：中华消化杂志, 2022, 42(10): 667-674.

• 癌, 肝细胞
• TMED4
• 细胞增殖
• 细胞迁移

目的检测跨膜emp24结构域蛋白4(TMED4)在肝癌患者肝组织中的表达情况, 并初步探究TMED4基因对肝癌细胞增殖和迁移能力的影响及其相关分子机制。方法采用蛋白质印迹法和免疫组织化学染色检测肝癌患者癌组织、癌旁组织中TMED4的蛋白质表达水平, 并分析其表达与患者的临床病理参数之间的相关性;分别通过细胞增殖实验、Transwell实验、划痕愈合实验和裸鼠皮下成瘤实验探究过表达或敲减TMED4基因对肝癌细胞体内外增殖、迁移和愈合能力的影响;通过通路分析初步探究TMED4基因调控肝癌细胞生物学行为的可能分子机制。统计学方法采用独立样本t检验、Mann-WhitneyU检验和卡方检验。结果蛋白质印迹法结果显示, TMED4在肝癌组织中的蛋白质表达水平低于其对应的癌旁组织(0.52±0.29比0.83±0.22), 差异有统计学意义(t=2.54, P=0.022)。免疫组织化学染色结果显示, TMED4在肝癌组织中的蛋白质表达水平低于其对应的癌旁组织(5.46±3.37比7.58±3.08),差异有统计学意义(t=3.49, P<0.001)。TMED4的蛋白质表达水平与患者是否发生肿瘤血管侵犯和巴塞罗那临床肝癌(BCLC)分期显著相关(χ2=6.83、4.20, P=0.009、0.040)。细胞增殖实验结果显示, SMMC-7721细胞中TMED4过表达组细胞的光密度值低于对照组(1.38±0.05比2.37±0.08), HepG2细胞中TMED4敲减组细胞的光密度值高于对照组(0.76±0.04比0.54±0.01), 差异均有统计学意义(t=18.23、8.85, 均P<0.001)。Transwell实验结果显示, SMMC-7721细胞中TMED4过表达组的迁移细胞数少于对照组(286.30±13.01比439.70±12.34), HepG2细胞中TMED4敲减组的迁移细胞数多于对照组(249.00±6.00比160.00±6.56), 差异均有统计学意义(t=14.81、17.34, 均P<0.001)。划痕愈合实验结果显示, SMMC-7721细胞中TMED4过表达组的细胞愈合率低于对照组[(0.21±0.01)%比(0.45±0.01)%], HepG2细胞中TMED4敲减组的细胞愈合率高于对照组[(0.46±0.01)%比(0.20±0.01)%], 差异均有统计学意义(t=200.10、30.46, 均P<0.001)。裸鼠皮下成瘤实验结果显示, TMED4过表达组细胞的生长速度较对照组缓慢, 细胞接种6周后, TMED4过表达组小鼠的皮下肿瘤体积小于对照组[27.36 mm3(138.70 mm3)比1 741.62 mm3(1 783.39 mm3)], 肿瘤质量低于对照组[0.06 g(0.14 g)比1.46 g(1.09 g)], 差异均有统计学意义(均Z=-2.31,均P<0.001)。蛋白质印迹法结果显示, SMMC-7721细胞中TMED4过表达组锌指转录因子(Snail)的蛋白质水平低于对照组(0.32±0.01比0.90±0.03), HepG2细胞中TMED4敲减组Snail的蛋白质水平高于对照组(1.03±0.01比0.97±0.01), 差异均有统计学意义(t=28.49、12.31, 均P<0.001)。实时荧光定量聚合酶链反应结果显示, SMMC-7721细胞中TMED4过表达组Snail的mRNA水平低于对照组(0.13±0.05比1.00±0.15), HepG2细胞中TMED4敲减组Snail的mRNA水平高于对照组(1.25±0.32比0.21±0.14), 差异均有统计学意义(t=9.62、5.10, P<0.001、=0.007)。结论 TMED4可能通过调控Snail的表达进而影响肝癌细胞的增殖和迁移能力, 其有望成为肝癌治疗的潜在靶点。

• 出版日期2022
• 单位南通大学附属医院