带Tat标记质粒载体的构建及其转导融合蛋白进入细胞的研究

作者：孙学刚; 宋革; 刘靖华; 李红乐; 邢飞跃; 张丽华; 秦清和; 姜勇

来源：中国生物化学与分子生物学报, 2003, 19(03): 354-358.

DOI：10.3969/j.issn.1007-7626.2003.03.015

• Tat
• 蛋白转导
• 增强型绿色荧光蛋白

采用点突变技术构建了带 6×His、Tat和Flag多个标记的pET HTF的质粒载体 ,利用基因重组技术构建pET HTF EGFP融合蛋白载体 .酶切和DNA测序证明 ,所构建的pET HTF和pET HTF EGFP载体正确 .BL2 1(DE3)表达融合蛋白 ,用Ni2 + 分离柱纯化His Tat Flag EGFP蛋白 ,并加入培养的NIH3T3细胞 .荧光显微镜观察显示 ,His Tat Flag EGFP融合蛋白进入细胞 .带His、Tat和Flag标记的质粒载体pET 14b HTF表达的融合蛋白能够进入细胞 ,该载体为进行蛋白质功能研究和基因治疗研究提供了一个重要工具

• 出版日期2003-6-15
• 单位南方医科大学