大鼠ERp57基因的原核表达及在精卵中的鉴定和定位

作者：朱晔敏; 刘悦; 郭强苏; 匡昉哲; 丁之德

来源：中国男科学杂志, 2010, (10): 12-15+24+74.

• ERp57
• 原核表达
• 蛋白定位
• 精子
• 卵子 ERp57
• prokaryotic expression
• protein localization
• spermatozoa
• ovum

目的克隆大鼠ERp57基因、原核表达蛋白并进行纯化,最终在大鼠精子和卵细胞中进行鉴定及定位。方法运用RT-PCR从SD大鼠睾丸组织的总RNA中克隆大鼠ERp57 cDNA,构建ERp57原核表达质粒[pET-28a(+)/ERp57]并转化E.coli的BL21菌株,IPTG诱导蛋白表达,经Ni-NTA树脂亲和层析得到纯化的ERp57蛋白。随后,通过SDS-PAGE、Western blot和酶联免疫吸附等实验对重组蛋白进行鉴定,并利用获得的蛋白免疫家兔制备多抗。最后,利用Western blot和间接免疫荧光定位的方法研究ERp57在精子和卵细胞中的定性和定位。结果成功获得纯化后重组的大鼠E...

• 出版日期2010
• 单位上海交通大学