Toll样受体4抑制剂TAK-242对Aβ25-35诱导PC12细胞毒性损伤的保护作用

作者：马成永; 林永忠; 王淳; 王前; 刘艳芝; 刘莹; 葛宇松

来源：中华神经医学杂志, 2016, 15(12): 1206-1211.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1671-8925.2016.12.004

• Toll样受体4
• TAK-242
• 髓样分化因子88
• β淀粉样蛋白25-35片段

目的探讨Toll样受体4(TLR4)抑制剂TAK-242在β淀粉样蛋白25-35片段(Aβ25-35)诱导PC12细胞毒性损伤中的保护作用及机制。方法利用CCK-8法检测不同浓度Aβ25-35(0、10、20、30μmol/L)作用PC12细胞24 h后的细胞存活率,以确定构建阿尔茨海默病(AD)细胞模型的Aβ25-35浓度,同时进一步检测TAK-242预处理1 h后该Aβ25-35浓度下的细胞存活率。将PC12细胞分为4组:正常对照组、Aβ处理组、TAK-242预处理组和TAK-242对照组。采用Hoechst33258染色检测各组细胞凋亡情况,采用酶联免疫反应吸附试验(ELLSA)检测各组细胞培养基上清液中白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平,采用Westernblotting检测各组细胞TLR4、髓样分化因子88(MyD88)、IκB激酶复合体(IKKα/β)和核因子-κB(NF-κB)表达水平。结果20μmol/LAβ25-35作用PC12细胞24 h后的细胞存活率约为0μmol/LAβ25-35组的50%,因此采用此浓度Aβ25-35构建AD细胞模型;并且经TAK-242预处理后,其细胞存活率较20μmol/L Aβ25-35组显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。Hoechst 33258染色显示TAK-242预处理组凋亡细胞较Aβ处理组明显减少。ELISA检测显示:与正常对照组相比,Aβ处理组IL-1β、TNF-α表达量明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与Aβ处理组相比,TAK-242预处理组IL-1β、TNF-α表达量明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。Westernblotting检测显示:与正常对照组相比,Aβ处理组TLR4、MyD88、IKKα/β和NF-κB蛋白相对表达量明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与Aβ处理组相比,TAK-242预处理组TLR4、MyD88、IKKα/β和NF-κB蛋白相对表达量显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 Aβ25-35可通过上调TLR4/MyD88信号通路蛋白表达,增加IL-1β、TNF-α释放,引起PC12细胞存活率下降,诱导细胞凋亡;TAK-242能通过负调控TLR4/MyD88信号通路,最终减少炎性因子IL-1β、TNF-α分泌,抵抗Aβ25-35诱导的PC12细胞毒性作用。

• 出版日期2016
• 单位神经内科; 大连医科大学附属第二医院