大蒜蒜氨酸酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

作者：来庆勤; 殷承慧; 胡又佳; 于美静; 刘全海

来源：中国医药工业杂志, 2010, 41(07): 496-500.

• 蒜氨酸酶
• 基因克隆
• 表达
• 纯化 alliinase
• gene cloning
• expression
• purification

提取大蒜总RNA,经RT-PCR扩增出1348bp的成熟蒜氨酸酶基因,克隆到pET-28a(+)载体中,构建带有寡聚组氨酸纯化标签的融合蛋白表达质粒。将重组质粒转化入大肠杆菌,经IPTG诱导后的表达产物大部分为包含体,SDS-PAGE电泳和western blotting结果表明目标蛋白的相对分子质量约5.3×104,占菌体总蛋白的45.1%。含6mol/L盐酸胍的溶液,经镍亲和色谱纯化和透析复性,每升摇瓶发酵液可得蛋白143.3mg,得率为13.6%,纯度为97%,蒜氨酸酶的比活力为388u/mg。

• 出版日期2010
• 单位创新药物与制药工艺国家重点实验室; 上海医药工业研究院