组织型纤溶酶原激活剂突变体瑞替普酶的原核表达、活性鉴定及酶动力学

作者：李飞; 朱美财; 占志; 马红雨; 蔡庆

来源：中国药理学与毒理学杂志, 2013, (03): 418-422.

• 组织型纤溶酶原激活物
• 突变
• 基因表达
• 酶类
• 动力学 tissue plasminogen activator
• mutation
• gene expression
• enzymes
• kinetics

目的重组表达抗纤溶酶原激活剂抑制剂(PAI)作用的组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)突变体(PA1 t-PA),经诱导表达、复性和纯化后进行生物学活性和酶动力学分析。方法构建pBV220-t-PA重组表达质粒,经DNA测序确认后,转化至大肠杆菌DH5α,温控诱导表达,凝胶过滤法对包涵体蛋白进行初步纯化,复性后,过刺桐胰蛋白酶抑制剂亲和层析柱纯化,酶动力学分析其活性。结果经测序t-PA突变体的DNA序列正确,表达蛋白占总菌体蛋白的30%,经纯化后纯度>95%,比活性为4.2×108 IU.g-1,t-PA突变体与PAI-1反应后其活性未受到抑制。t-PA突变体酶的米氏常数Km为0.3298μmol...

• 出版日期2013
• 单位河北北方学院; 中国人民解放军空军总医院