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摘要
目的 观察ghrelin及其受体生长激素分泌素受体1a(GHSR-1a)在高糖环境下对视网膜血管内皮细胞的保护作用。方法 将体外培养的人视网膜血管内皮细胞(HRMECs)分为对照组和高浓度葡萄糖组。对照组细胞在含5.5 mmol·L~(-1)葡萄糖的M199培养基中培养48 h,高浓度葡萄糖组细胞在含30.0 mmol·L~(-1)葡萄糖的M199培养基中培养48 h,采用免疫荧光染色法检测两组细胞中GHSR-1a的表达。然后另取HRMECs随机分为5组：正常对照(NC)组、高糖(HG)组、HG+ghrelin组、HG+ghrelin+siGHSR-1a组和HG+ghrelin+NC-siGHSR-1a组，孵育48 h。NC组处理同对照组，HG组处理同高浓度葡萄糖组，HG+ghrelin组细胞在含30.0 mmol·L~(-1)葡萄糖、10.0 nmol·L~(-1) ghrelin的M199培养基中培养，HG+ghrelin+siGHSR-1a组细胞先转染GHSR-1a-特异性siRNA,24 h后在含30.0 mmol·L~(-1)葡萄糖和10.0 nmol·L~(-1) ghrelin的M199培养基中培养，HG+ghrelin+NC-siGHSR-1a组细胞先转染非特异性序列，24 h后在含30.0 mmol·L~(-1)葡萄糖和10.0 nmol·L~(-1) ghrelin的M199培养基中培养。分别采用CCK-8和Annexin-V/FITC-PI凋亡检测试剂盒检测各组HRMECs细胞活力和细胞凋亡情况。Western blot检测凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达。结果 高浓度葡萄糖组的GHSR-1a表达低于对照组(P<0.05)。NC组、HG组、HG+ghrelin组、HG+ghrelin+siGHSR-1a组和HG+ghrelin+NC-siGHSR-1a组的细胞活力分别为1.00、69.87%±0.68%、92.31%±3.62%、75.98%±4.67%和90.87%±1.95%,总体比较差异有统计学意义(P<0.001);两两比较显示，除HG+ghrelin组与HG+ghrelin+NC-siGHSR-1a组的细胞活力差异无统计学意义(P>0.05)外，其余各组细胞活力比较差异均有统计学意义(均为P<0.05)。NC组、HG组、HG+ghrelin组、HG+ghrelin+siGHSR-1a组和HG+ghrelin+NC-siGHSR-1a组的细胞凋亡率分别为5.76%±0.36%、20.53%±0.38%、10.84%±0.52%、14.93%±0.18%和11.03%±0.62%,总体比较差异有统计学意义(F=468.88,P<0.001);两两比较显示，除HG+ghrelin组与HG+ghrelin+NC-siGHSR-1a组细胞凋亡率差异无统计学意义(P>0.05)外，其余各组细胞凋亡率比较差异均有统计学意义(均为P<0.05)。NC组、HG组、HG+ghrelin组、HG+ghrelin+siGHSR-1a组和HG+ghrelin+NC-siGHSR-1a组细胞的Bax蛋白和Bcl-2蛋白相对表达量分别为0.17±0.03和0.64±0.05,0.75±0.04和0.14±0.02,0.38±0.04和0.49±0.08,0.56±0.04和0.33±0.07,0.40±0.06和0.46±0.09,总体比较差异均有统计学意义(均为P<0.001);两两比较显示，除HG+ghrelin组与HG+ghrelin+NC-siGHSR-1a组Bax蛋白和Bcl-2蛋白表达差异均无统计学意义(均为P>0.05)外，其余各组Bax蛋白和Bcl-2蛋白表达比较差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论 ghrelin-GHSR-1a系统对高糖环境下的HRMECs功能具有保护作用，并抑制高糖诱导的HRMECs凋亡。
- 出版日期2022
- 单位西安医学院; 西安医学院第一附属医院
