微小牛蜱Bm86基因的真核表达

作者:李文卉; 罗建勋; 殷宏; 关贵全; 马米玲; 刘志杰; 刘爱红; 党志胜; 高金亮; 任巧云
来源:中国兽医科技, 2005, (09): 718-722.
DOI:10.16656/j.issn.1673-4696.2005.09.011

摘要

采用RT-PCR技术从微小牛蜱饥饿幼蜱破解物中扩增到Bm86基因,将其与巴斯德毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K重组构建了重组表达载体pPIC9K-Bm86,测序正确后将其用SacⅠ内切酶线性化后采用电穿孔法转化巴斯德毕赤酵母菌GS115,经G418抗性筛选高拷贝重组菌株后用甲醇诱导表达,SDS-PAGE和Western-blotting分析结果表明,诱导表达的培养上清液中表达出具有反应活性的68 ku重组Bm86蛋白,目的蛋白约占培养上清液中蛋白总量的32%以上,诱导96 h目的蛋白的表达量为0.36 mg/mL。

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