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摘要
目的进一步了解尼罗罗非鱼免疫球蛋白的结构和功能。方法通过RACE技术得到Ig T c DNA全长,从m RNA水平检测其在不同发育时期和不同组织中的表达情况,并通过q PCR检测在嗜水气单胞菌刺激情况下Ig T和Ig M的免疫应答规律,构建重组表达载体体外表达部分恒定区序列并制备单克隆抗体。结果克隆得到全长为1 759 bp的c DNA序列,编码506个氨基酸,表达重组蛋白,纯化得到目标蛋白,并获得CH3的单克隆抗体。RT-PCR结果显示,Ig T在受精后的第8天即可检测到,Ig T在4月龄鱼头肾和脾脏中表达,在6月龄鱼中,除在以上2个组织中表达之外,在皮肤、肠、鳃、卵巢和精巢中也可检测到。嗜水气单胞菌刺激后,q PCR结果显示:Ig T和Ig M在头肾、肾、脾脏、肠、鳃和皮肤中均有不同程度的上调。结论克隆得到尼罗罗非鱼Ig T重链c DNA序列并成功制备了单克隆抗体,为免疫球蛋白及其免疫系统的研究奠定了基础。
- 出版日期2016
- 单位西南大学; 三峡库区生态环境教育部重点实验室; 生命科学学院
