联合PCR技术克隆白纹伊蚊漆酶型酚氧化酶基因及其生物信息学分析

作者：刘静; 吴瑜; 詹希美; 冯崑尧; 甘明; 张美春; 郑小英; 李卓雅; 何蔼

来源：热带医学杂志, 2011, 11(05): 500-504.

• 巢式PCR
• 3’RACE
• 白纹伊蚊
• 漆酶型酚氧化酶 nested-PCR
• 3'RACE
• Aedes albopictus
• laccase-type phenoloxidase

目的测定白纹伊蚊漆酶型酚氧化酶的基因的全长序列并用生物信息学方法分析其结构和功能。方法从白纹伊蚊卵、幼虫、蛹、雌蚊、雄蚊中提取总RNA,逆转录后以总cDNA为模板,设计简并引物进行巢式PCR,扩增部分序列后设计新的特异性引物补全5’端序列,使用3’-RACE法补全3’端序列,拼接全长后进一步进行生物信息学分析。结果通过巢式PCR扩增出1145bp的核苷酸序列,测序后设计5’端序列的下游引物,扩增出约900bp的核苷酸序列,设计3’端的上游引物,配合3’RACE试剂盒扩增出约600bp的核苷酸序列,寻找重复序列将三段序列进行拼接,得到国内外从未获得的长2244bp、编码747个氨基酸序列的白纹伊...

• 出版日期2011
• 单位中山大学; 中山大学中山医学院