报道了一种新的PCR突变方法,它不需要纯化大引物或设计特别的旁侧引物.利用一个诱变引物和两个测序引物(Tm≤58℃)作为旁侧引物.第一轮PCR产物12.5μl直接加入到50μl的第二轮PCR反应体系作为模板和大引物,在开始第二轮PCR反应时,增加在68℃退火温度下进行10个循环的不对称PCR,这一步骤大大提高了通过600bp或800bp大引物所导致的突变效率.结果表明,该方法的产物能够达到高保真、97%～98%的突变效率和高产率.
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