A型口蹄疫VP1基因的原核表达及纯化

作者：刘清源; 向华; 黄元; 陈晶; 向蓉; 郑海学; 刘宇

来源：黑龙江畜牧兽医, 2016, (09): 173-176.

DOI：10.13881/j.cnki.hljxmsy.2016.0801

• 口蹄疫病毒(FMDV)
• VP1基因
• 克隆表达
• 鉴定
• 纯化 Foot-and-mouth disease virus(FMDV)
• VP1 gene
• cloning and expression
• identification
• purification

为了研究A型口蹄疫病毒(FMDV)VP1蛋白的免疫原性,试验采用PCR方法从口蹄疫阳性质粒p MD-18-P1中扩增得到目的基因VP1,与原核表达载体p ET-28a连接,构建重组质粒p ET-28a-VP1,转化大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞,筛选的阳性菌落用IPTG诱导表达,收集菌液进行SDS-PAGE电泳,通过Western-blot分析蛋白的免疫原性,并用镍亲和树脂纯化鉴定后的重组蛋白。结果表明:重组质粒p ET-28a-VP1经PCR及酶切鉴定证明构建正确;重组质粒能够在大肠杆菌中大量表达,表达产物的分子质量大小约为26 ku,且能被口蹄疫阳性血清识别;镍亲和树脂纯化的蛋...

• 出版日期2016
• 单位中国农业科学院兰州兽医研究所; 华南农业大学; 广东省农业科学院动物卫生研究所