基于MITF与PI3K/AKT信号通路探讨多种单味中药对黄褐斑的作用机制

作者：倪晨宁^*; 王小勇; 石海兰; 沈肖奋

来源：浙江中西医结合杂志, 2023, 33(09): 788-796.

• 豚鼠
• 黄褐斑
• 小眼畸形相关转录因子
• 磷脂酰肌醇3激酶
• 蛋白激酶B
• 甘草
• 当归
• 赤芍

目的 基于小眼畸形相关转录因子（MITF）与磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路探究多种单味中药对黄褐斑的作用机制。方法 水煎法制备甘草、当归、赤芍药液。黑素细胞分为0、50、100、500、1000μg/mL及1000μg/mL+LY294002组，培养基中加入相应浓度的中药药液与25 nmol LY294002,MTT法检测不同剂量药物细胞毒性，测定酪氨酸酶活性与黑色素含量，Western blot检测MITF、PI3K/AKT信号通路相关分子水平。30只5周龄豚鼠按照随机数字表法分为对照组、模型组、甘草组、当归组、赤芍组，每组6只。中波紫外线照射建立黄褐斑模型，甘草组、当归组、赤芍组分别接受0.3 mg/kg甘草、当归、赤芍药液灌胃，对照组、模型组接受等体积生理盐水灌胃，持续4周。切取豚鼠背部造模处皮肤，测定黑色素含量，HE、Fontana-Masson染色观察皮肤组织形态，Western blot、免疫组化检测MITF、PI3K/AKT信号通路相关分子水平。结果 与各0μg/mL组比较，甘草、当归、赤芍1000μg/mL组细胞活力、酪氨酸酶活性、黑色素含量均明显降低[甘草：（66.82±9.65）%比100.00%,(65.07±5.13)%比100.00%,(55.56±3.17)%比100.00%；当归：（56.62±15.99）%比100.00%,(52.69±5.52)%比100.00%,(54.69±4.05)%比100.00%；赤芍：（77.51±7.33）%比100.00%,(67.60±10.66)%比100.00%,(61.80±12.89)%比100.00%;P<0.05]，因此后续各中药均选用1000μg/mL剂量进行实验。Western blot检测结果显示，与各0μg/mL组比较，甘草、当归、赤芍1000μg/mL组MITF表达水平降低[（0.28±0.04）比（0.99±0.08）,(0.28±0.04)比（1.14±0.08）,(0.43±0.09)比（0.84±0.13）;P<0.05],p-PI3K、p-AKT、p-GSK3β表达水平升高[甘草：（1.08±0.07）比（0.61±0.07）,(0.79±0.07)比（0.33±0.08）,(0.78±0.06)比（0.41±0.06）；当归：（1.38±0.07）比（1.01±0.07）,(1.27±0.05)比（0.83±0.08）,(0.78±0.06)比（0.39±0.06）；赤芍：（0.83±0.12）比（0.41±0.07）,(0.79±0.07)比（0.29±0.08）,(0.82±0.04)比（0.31±0.06）;P<0.05]。与对照组比较，模型组豚鼠背部皮肤黑色素含量升高[（3060.21±431.62）%比100.00%,P<0.05]，皮肤组织结构紊乱，黑色素沉积明显增多；与模型组比较，甘草组、当归组、赤芍组豚鼠背部皮肤黑色素含量降低[（1820.34±385.08）%、（1181.43±347.24）%、（2229.87±554.25）%比（3060.21±431.62）%,P<0.05]，皮肤组织结构较为完整，黑色素沉积减少。Western blot、免疫组化检测结果显示，与对照组比较，模型组MITF表达水平升高[（1.47±0.18）比（0.41±0.07）,(2.71±0.17)比（1.00±0.05）;P<0.05],p-PI3K、p-AKT、p-GSK3β表达水平降低[p-PI3K:(0.15±0.03)比（0.59±0.06）,(0.64±0.06)比（1.00±0.05）;p-AKT:(0.25±0.04)比（0.82±0.06）,(0.73±0.09)比（1.00±0.05）;p-GSK3β:(0.23±0.05)比（0.79±0.07）,(0.56±0.09)比（1.00±0.05）;P<0.05]。与模型组比较，甘草组、当归组、赤芍组MITF表达水平降低[（0.85±0.07）、（0.67±0.05）、（0.92±0.06）比（1.47±0.18）,(1.79±0.15)、（1.51±0.13）、（1.94±0.12）比（2.71±0.17）;P<0.05],pPI3K、p-AKT、p-GSK3β表达水平升高[p-PI3K:(1.18±0.06)、（1.30±0.09）、（1.13±0.08）比（0.59±0.06）,(1.57±0.12)、（1.70±0.12）、（1.50±0.08）比（1.00±0.05）;p-AKT:(1.12±0.06)、（1.15±0.04）、（1.08±0.06）比（0.82±0.06）,(1.68±0.14)、（1.79±0.10）、（1.49±0.12）比（1.00±0.05）;p-GSK3β:(1.04±0.12)、（1.09±0.12）、（1.00±0.11）比（0.79±0.07）,(1.81±0.14)、（1.96±0.09）、（1.67±0.15）比（1.00±0.05）;P<0.05]。结论 甘草、当归、赤芍可能通过激活PI3K/AKT信号通路，抑制MITF表达，减少皮肤黑色素沉积，进而缓解黄褐斑症状。

• 出版日期2023
• 单位浙江中医药大学