改进的四引物扩增受阻突变体系PCR方法同时检测叶酸代谢过程相关的四个单核苷酸多态性位点的研究

作者：段素霞; 李贵霞; 赵梦川; 王乐; 冯志山; 张益; 马学军

来源：中华检验医学杂志, 2017, 40(10): 799-804.

• 叶酸
• 代谢
• 多态性,单核苷酸
• 聚合酶链反应
• 电泳,毛细管
• DNA突变分析
• DNA引物

目的建立改进的四引物扩增受阻突变体系PCR(T-ARMS-PCR)检测方法,实现单管一次性检测叶酸代谢过程相关的4个单核苷酸多态性(SNP)位点:rs1801133,rs1801131,rs1805087和rs1801394。方法方法学建立。于2017年1至4月在河北省儿童医院检验科收集150名体检儿童抗凝全血标本以待验证。利用T-ARMS-PCR原理及多重嵌合引物策略设计rs1801133、rs1801131、rs1805087及rs1801394的特异性内外嵌合引物。通过优化引物浓度和反应条件,经单管PCR反应,结合QIAxcel毛细管电泳分析扩增产物长度,判读150份标本的SNP基因型,同时所有标本经测序法进一步验证。利用SPSS 17.0统计软件卡方检验对150份标本的4个SNP位点分别进行哈迪-温伯格遗传平衡(HWE)检测。结果改进的T-ARMS-PCR结合毛细管电泳分析的方法可在3 h内一次性识别本研究中叶酸代谢过程相关的4个SNP位点的8个不同等位基因,可对150份全血标本的SNP位点准确分型,其分型结果与测序法完全相符。4个SNP位点基因型的分布均符合HWE平衡定律(χrs18011332=0.69,Prs1801133)=0.40;χrs18011312 =0.21,Prs1801131=0.64;χrs1805087)2 =3.32,Prs1805087=0.07;χrs1801394)2 =1.91,Prs1801394=0.17)。结论本研究建立的改进的T-ARMS-PCR结合毛细管电泳分析方法,可准确地同时检测叶酸代谢过程相关的4个SNP位点,为指导人群特异性地补充叶酸提供了一种可能的技术手段。

• 出版日期2017
• 单位河北省儿童医院; 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所; 河北医科大学