蛋白酶体抑制剂MG132诱导HL-60细胞表达共刺激分子CD86的信号转导途径、凋亡途径及对混合淋巴细胞反应的影响

作者：周咏明^*

来源：博士, 华中科技大学, 2007-05-01.

• 蛋白酶体抑制剂
• 抗原,CD86
• 信号转导通路
• 凋亡通路
• 混合淋巴细胞反应

研究目的研究蛋白酶体抑制剂MG132诱导急性髓性白血病细胞HL-60细胞表达共刺激分子CD80、CD86的信号转导途径,诱导HL-60细胞的凋亡途径及其对混合淋巴细胞反应的作用。研究方法流式细胞仪检测MG132诱导HL-60细胞表达共刺激分子CD80、CD86及细胞活力和细胞凋亡,并检测用蛋白激酶通路抑制剂G?6976、JNK通路抑制剂SP600125、Caspase-8抑制剂Z-IETD-FMK、Caspase-9抑制剂Z-LEHD-FMK、组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A和p21和p27MAPK通路抑制剂Apigenin阻断蛋白酶体抑制剂MG132蛋白激酶通路、JNK通路、、Caspase-8通路、Caspase-9通路、组蛋白乙酰化酶通路和p21和p27MAPK通路后MG132诱导HL-60细胞CD80与CD86的表达,检测应用Caspase-8抑制剂Z-IETD-FMK和Caspase-9抑制剂Z-LEHD-FMK阻断MG132的Caspase-8和Caspase-9通路后HL60细胞的凋亡;RT-PCR分析蛋白酶体抑制剂MG132诱导HL-60表达共刺激分子CD80和CD86 mRNA的情况,分析阻断蛋白酶体抑制剂MG132蛋白激酶通路、JNK通路、、Caspase-8通路、Caspase-9通路、组蛋白乙酰化酶通路和p21和p27MAPK通路后MG132诱导CD80与CD86 mRNA的表达;Western blot检测MG132诱导HL-60细胞凋亡后,p21、p27和p53蛋白的表达;75Gy照射MG132诱导的HL-60细胞后,用CCK-8检测提高共刺激分子表达后,HL-60细胞对健康人单个核细胞的增殖作用。研究结果小剂量的MG132上调HL-60细胞表达CD86,不诱导CD80的表达,应用p21和p27MAPK通路抑制剂Apigenin阻断蛋白酶体抑制剂MG132诱导HL-60细胞表达CD86的p21和p27MAPK通路后,CD86的表达明显减少,CD80变化不明显,表明MG132诱导HL-60细胞表达共刺激分子CD86可能通过p21和p27MAPK途径;而应用蛋白激酶通路抑制剂G?6976、JNK通路抑制剂SP600125、Caspase-8抑制剂Z-IETD-FMK、Caspase-9抑制剂Z-LEHD-FMK、组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A阻断MG132诱导HL-60细胞表达共刺激分子CD86的蛋白激酶通路、JNK通路、、Caspase-8通路、Caspase-9通路、组蛋白乙酰化酶通路后,CD86无明显变化。大剂量的MG132对HL-60细胞有直接杀灭作用,可诱导HL-60细胞的凋亡,应用Caspase-8抑制剂Z-IETD-FMK、Caspase-9-LEHD-FMK抑制剂阻断MG132诱导HL-60细胞的Caspase-8通路、Caspase-9通路后,细胞凋亡无明显变化,表明MG132诱导HL-60的凋亡可能不通过Caspase-8通路、Caspase-9通路。Western blot检测MG132诱导HL-60细胞凋亡后p21、p27、p53蛋白的表达,p21蛋白、p27蛋白在MG132作用HL-60细胞后表达升高,p53蛋白变化不明显。用MG132提高HL-60细胞表达共刺激分子CD86后,对健康人单个核细胞起增殖作用。研究结论小剂量的蛋白酶体抑制剂MG132诱导HL-60细胞表达共刺激分子CD86,其诱导CD86表达的途径可能与p21和p27MAPK途径有关,而与蛋白激酶通路、JNK通路、、Caspase-8通路、Caspase-9通路、组蛋白乙酰化酶通路无关。大剂量的MG132诱导HL-60细胞凋亡,对HL-60细胞有直接杀灭作用,MG132诱导的HL-60细胞凋亡不通过caqspase-8和caspase-9途径,p21蛋白、p27蛋白可能参与了MG132诱导的HL-60细胞凋亡,p53蛋白的表达无明显变化。小剂量MG132促进对健康人单个核细胞的增殖作用,可提高机体的免疫性。

• 出版日期2007-5-1