抗乙酰胆碱受体单链抗体原核表达载体及表达菌株的构建

作者：陈辉; 李柱一; 徐江; 张惠中

来源：中国神经免疫学和神经病学杂志, 2006, (06): 319-322.

• 单链抗体
• 乙酰胆碱受体
• 原核表达载体

目的将含有抗人乙酰胆碱受体(AChR)单链抗体基因的载体重新构建并建立表达菌株。方法采用聚合酶链反应(PCR)从质粒pHEN1中克隆单链抗体scFv1929#全长基因,将PCR产物再定向克隆至载体pET32a(+)的多克隆位点中,并转入大肠杆菌BL21(D E3)plysS以构建表达菌株。结果PCR产物约730bp,与预期一致,重组阳性克隆菌株JM109+pET32a(+)-scFv1929#经菌液PCR可见730 bp处有特异性条带,所提取质粒pET32a(+)-scFv1929#经PCR及酶切鉴定正确,经测序后证实scFv1929#的核苷酸序列正确并正确地插入载体pET32a(+)的读码框内。将新构建载体转化大肠杆菌BL21(D E3)plysS以获得表达菌株。结论已成功地重新构建含有抗AChR单链抗体基因的载体并建立大肠杆菌表达菌株BL21(D E3)plysS+pET32a(+)-scFv1929#,为今后表达抗AChR单链抗体scFv1929#融合蛋白打下基础。

• 出版日期2006-11-15
• 单位第四军医大学