AMPKγ基因沉默对AMPK活化及调血脂作用的影响

作者：苏岩; 郭鹏; 季宇彬

来源：药学学报, 2013, (06): 842-847.

DOI：10.16438/j.0513-4870.2013.06.017

• HepG2细胞系
• 腺苷蛋白激酶
• 慢病毒载体
• RNA干扰 HepG2 cell
• AMP-activated protein kinase
• lentivirus vector
• RNA interference

构建针对AMPKγ基因的siRNA慢病毒载体,检测其介导的RNA干扰对人肝癌细胞株HepG2中AMPKγ基因表达的沉默作用,并考察AMPKγ基因沉默对天然AMPK激动剂虫草素激活AMPK和调节脂质合成的影响。设计并合成了特异针对AMPKγ基因的shRNA Oligo片段,经退火、酶切、连接将目的片段插入到慢病毒干扰载体中,经感受态细胞转化、PCR鉴定挑选阳性克隆测序后,与包装质粒和包膜质粒共转染至293T细胞包装病毒,收集浓缩病毒进行滴度测定。通过荧光观察和Western blotting筛选可有效沉默AMPKγ基因的慢病毒株。在AMPKγ基因稳定沉默细胞株中,利用Western blotti...

• 出版日期2013
• 单位哈尔滨商业大学; 中国医学科学院药用植物研究所; 中国医学科学院北京协和医院